周沛:揭开非瘟病毒“伪装的马甲”,猪群采样如何避免误检?

《农财宝典》新牧网记者 李宗林
 
非瘟常态化形势下,消毒工作在猪场生产中的地位愈发重要,而如何科学消毒?消毒效果如何检验?业内往往缺乏科学的认知。2021年5月16日,在南方农村报主办,农财宝典、新牧网承办,宁波第二激素厂特约“2021第二届中国畜牧业生物安全大会”上,幻影三陆零特邀,华南农业大学副教授周沛给大家带来《非洲猪瘟消杀测评》,从非瘟病毒的组成、消毒剂测评步骤、消毒剂测评结果三方面为大家详细解读。
 
 周沛:揭开非瘟病毒“伪装的马甲”,猪群采样如何避免误检?
 

华南农业大学副教授周沛(幻影三陆零特邀)

 
非洲猪瘟病毒结构复杂,疫苗研发难度较大
 
周沛首先为观众普及非洲猪瘟病毒(ASFV)的组成,ASFV基因组大小约为170-190kb,巨大的基因组导致在检测过程中易核酸污染。并且ASFV是双链的、闭合的线性DNA病毒,其结构特性也决定了它在自然界中较难降解,且变异速度慢。周沛提醒广大养户“技术人员在生产现场检测到了病毒阳性,很多情况并不是活病毒,而是核酸的污染”
 
ASFV的基因组结构决定了其蛋白质编码特别多,据统计大约能够编码160多种蛋白质,其中包括许多未知的蛋白质,并且宿主来源蛋白多,其编码的蛋白质很多功能当下也没有研究透彻。基于其“蛋白数量多、未知蛋白多、未知功能多、宿主来源蛋白多”的四大特点,非洲猪瘟疫苗的研发难度大。

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ASFV的结构复杂,基因由外囊膜、衣壳、双层内膜、核心壳层包裹,在如此多的蛋白质包裹下,有效保护了ASFV的遗传物质不被破坏,在消毒剂及消毒产品使用时,就易出现病毒外层蛋白质结构消耗消毒剂,病毒遗传物质依然保留的情况。
 
病毒最外层存在着外层囊膜结构,囊膜是来源于宿主,也就是猪只本身,这个“伪装的马甲”使得病毒伪装效果非常好。非洲猪瘟病毒颗粒大,直径约260nm的大小,但是庞大的颗粒并没有使得它容易被装置空气过滤,实际上相比几十纳米的颗粒,300nm左右的颗粒布朗运动缓慢,反倒更易穿过空气过滤装置。
 
消毒剂检测要遵循科学,三大问题需要注意

 
在猪群监测过程中,采样工作其实是有科学的公式可以参考的,科学的采样方法可以减轻工作量避免“头头检”,一定程度上也可以避免漏检。消毒测评过程也应遵循科学,据周沛介绍,具体过程可分为三个阶段:消毒剂与病毒反应-中止反应-接种细胞,其中有三大问题需要注意。
 
首先,我们需要关注消毒剂对细胞有没有影响?消毒结束后病毒接种在细胞皿上能否增殖,取决于病毒是否存活、细胞是否存活两方面因素。为避免假阴性,消毒剂对细胞的影响一定要检测,残留消毒剂的去除方法,包括“中和法、过滤冲洗法、稀释法”。周沛表示,经过实践摸索,稀释法会更加稳定。
 
第二点,在做消毒剂评估时,需要经过巨大的稀释,而病毒经过稀释后,还是否呈现阳性也有待考究。周沛建议,病毒经过稀释后含量一定要大于103,只有当病毒含量足够大时,才能证明检测效果。
 
第三点,一定要设立阳性对照组。而阳性对照组的选择也是有讲究的,病毒检测与消毒剂检测一样,都需要中止反应后再接种细胞。
 
最后,周沛向观众们展示了实验室消毒剂测评的结果。物理灭活ASFV方案中,高温消毒在55.2℃以上消毒效果较好;暴晒在40min以内能将病毒有效杀灭;干燥也具备一定的效果,但基于其时间周期较长并不推荐。
 
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同时周沛也向观众分享了各类消毒剂化学灭活ASFV的评测。根据表格可以发现次氯酸、二氧化氯、季铵盐在短时间内就能达到有效杀灭病毒的效果。氯制剂虽然能够有效裂解ASFV核酸,但是有机物对其影响较大。同时周沛提醒观众,消毒设备的升级也会对猪场ASFV的杀灭起到较大帮助。

周沛:揭开非瘟病毒“伪装的马甲”,猪群采样如何避免误检?
 

幻影三陆零展位展示
 

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