猪场病料采集及注意事项

猪场病料采集有多种类型,包括鼻拭子,口腔拭子,肛门拭子,血液样及各类组织样,当前非瘟荧光PCR检测使用较多的是鼻拭子、口腔拭子及环境样拭子,猪场常规监测更多的是应用ELISA检测血液中抗体的变化,如果想做抗原检测会取内脏组织样做PCR检测或分离病毒细菌。采集不同类型的样品有着不同的方法及注意事项,这里重点介绍血液样及组织样的采集及其注意事项。

一、做好人员、物资、运输方面前期的准备。

要求采样人员采样技术熟练,如无相关经验最好做简单培训再操作;按计划采样时保鲜袋、自封袋、真空采血管及EP管数量要充足,同时最好备有一台高速离心机;采集好的病料要能及时送达实验室,应作好相关的运输计划安排。采样器、保定绳套等还要注意消毒、运输容器及冰块也要提前准备好。要求做好各项准备工作后再进行样品采集。

1. 一次性注射器(5mL),10 毫升抗凝管,酒精棉球若干(采集血样)

2. 2mL 离心管,棉签(2 支/头),500mL 生理盐水(采集唾液拭子)

3. 10mL 离心管,淋巴取样器(1 支/头),500mL 生理盐水,酒精棉球若干(采集淋巴)

4. 解剖刀柄(1 把),解剖刀片(1 包)(采集组织样品)

5. 一次性手套若干双,乳胶手套若干双,防护服若干套、水鞋(1 套/人), 保定绳(8根),记号笔3 支

6. 带冰袋采样泡沫箱/车载冰箱(1 个),3%烧碱消毒桶(1 个),1:200 卫可消毒桶(1个),高于70 度水温消毒桶(1 个),75%酒精(500mL),生石灰若干

二、血液样采集

1 采血前先做好猪只保定。

(1) 保定绳在水温超过70 摄氏度的消毒桶先浸泡10 分钟;

(2) 采样人员穿上工作服和干净的水鞋,带上乳胶手套,外套一次性防护服;

(3) 人员脚踏3%烧碱消毒桶,进入栏舍;

20Kg 以下猪只取仰卧保定,20Kg以上猪只以保定绳套保定,让猪的胸前凹窝充分暴露。

2 采血。

(1)尽量取前腔静脉采血:猪前腔静脉,在第一对肋骨间的胸腔入口处的气管腹侧面,由左右两侧颈静脉和腋静脉汇合形成。该血管在一周龄猪直径约5毫米,成年猪约1厘米以上。采血部位在第一对肋骨与胸骨柄结合处直前,但由于左侧靠近隔神经,以右侧采血为宜。

猪场病料采集及注意事项

猪场病料采集及注意事项

猪前腔静脉采血图

(2) 选用合适的注射器及针头

公母猪宜选用16号 50mm针头;30kg以上的中大猪,宜选用12号38mm针头;10-30kg小猪,可选用9号 25mm(一次性注射器常配的针头);10kg以下仔猪,应选择9号 20mm针头。

(3)选准进针的部位

一般来说,30千克以下的小猪应采两前肢与气管交汇处,种公母猪和30千克以上的中大猪可选颈部最低凹处。进针时又要掌握好一定的方向、角度和深度,要及时调整。血管被刺穿,会引起血肿,要立即停止采血,须换另一头猪采血。特别要注意的是对仔猪采血时,不能太猛、太深,以免伤及心包或心脏。

3 血液样保存及运输

(1)用真空采血器采集的血样,直接倾斜放置好。

(2)夏天在常温下放置一段时间,冬天要放置在25~37℃温水中一段时间,以利于血液中血清的析出。

(3)血样送检时,在保温箱加适量的冰块防止血液变质,送检过程中尽量防止剧烈振荡。

需要指出的是,血液和血清是完全不同的概念!血清是血液的组成部分,它必须从血液中分离出来后,才能用于血清学试验,但这种分离过程需要专业人员来操作。因此,采集的血样,最好在凝固后,直接送到检测单位,以保证血清学试验的正确进行。一般采血2~5毫升就足以满足实验室诊断的用量了。【提示,用于血清学试验的血样,不能加任何抗凝血剂!

4、血液样采集注意事项:

(1)擦拭采血部位的酒精未干,不要立即采血。血液混进酒精后易造成溶血(使检测结果不准);

(2)血液在运输过程中,防止剧烈展荡,使血细胞破裂引起溶血(要注意血液防震)

(3)血液存放的容器要确保干燥。

三、组织样采集:

(一)疑似猪瘟的病料采集:

1 放血。先把猪腋下动脉放血处死。

2 解剖摘取扁桃体。从胸部中线偏右处,切断肋骨,打开胸腔,在气管与肺脏连接处向前5~10厘米位置,割断气管,并顺着气管向前割开,直至咽喉部,从后向前将气管割断一半,这时就可以在舌跟靠近上腭的左右两边看到两个淋巴结,即扁桃体。小心取下扁桃体放置于干净的保鲜袋中,并做标记。

3 解剖摘取肺门淋巴结。一只手握住气管切断处,使劲向外拉出肺脏,另一只手帮忙扯断肺脏与身体的连接,并将整个肺脏翻转过来,使背面向上,此时可在支气管与肺脏连接处,找到分别位于左右两侧的两个肺门淋巴结,小心摘取,放置于另一个干净的保鲜袋中,并做标记。

4 肺脏样品的采集。如有必要,可割取部分肺脏样品,一般只要割取介于病变和正常组织之间的部分,放置于一个干净的保鲜袋中,并做标记,当然也可以将整个肺脏保存。

5 解剖摘取腹股沟淋巴结。将两条后腿,向下向外压,就可以在两侧凹陷的腹股沟处中间部位,看到微微或明显的隆起,即腹股沟淋巴结,小心割开皮肤和淋巴结表面的被膜,小心摘取,放置于一个干净的保鲜袋中,并做标记。

6 解剖摘取脾脏。沿腹中线将腹部皮肤、肌肉和腹膜,小心切开并打开腹腔,在腹腔的左侧位于胃和回肠下面,找到脾脏,小心摘取,放置于一个干净的保鲜袋中,并做标记。

7 解剖摘取肠系膜淋巴结。从腹腔的右侧位于肝脏和胃下面,找到肠系膜,在肠系膜靠近肠道的末端,可以看到很多结节,即肠系膜淋巴结,小心摘取,放置于一个干净的保鲜袋中,并做标记。

8 流产胎儿。对于新鲜流产的胎儿,可作为检测样品。对于流产日龄较早的胎儿,可取整个胎儿保存;如果是晚期流产的胎儿,最好根据上述步骤,摘取相应组织,保存送检。

(二)、疑似蓝耳病病例的病料采集:

具体病料采集程序与猪瘟病料的采集基本一致(包括步骤1、3至6、8),需要强调的是,在蓝耳病的检测中,必须包括淋巴结和肺脏样本!如果检测流产胎儿,那么,最好能剪取部分胎衣液或剪取胎衣样本,保存方法同上。

(三)、疑似圆环病毒感染病例的病料采集:

对于疑似圆环病毒感染的病例,病料采集包括步骤1、3至7。记住,在圆环病毒的检测中,必须包括淋巴结样品。

(四)、疑似伪狂犬病病例的病料采集:

因伪狂犬病病毒可危害呼吸系统、繁殖系统或中枢神经系统,因此,病料采集包括步骤1至8。同时,还要采集神经系统的样品。具体步骤为用手术刀片将猪的头皮剥去,露出头盖骨,然后用凿子(也可用一字螺丝刀),轻轻凿开头盖骨,并清理骨头碎片,等整个大脑露出后,小心用手摘取,放置于一个干净的保鲜袋中,并做标记。

(五)、疑似流行性腹泻病例的病料采集:

本病的病料采集,包括步骤1、5、7。同时需要采集肠道样品。从腹腔中剪取病变的小肠10~15厘米,从一侧将肠道剪开,轻轻刮去肠道内容物,然后放置于一个干净的保鲜袋中,并做标记。

(六)疑似流感病例的病料采集:

按照上述方法采集肺脏和淋巴结即可。

(七)检测病料的运输注意事项:

(1)死亡的猪应尽快采集,夏天不应超过2小时,冬天不超过6小时。

(2)采集猪的病料必须新鲜,要采集有病变部位的材料,尽可能减少污染。

(3)用于检验的内脏组织块不必太大。但取样要有代表性 对每一器官,应在各个不同部位多取几块组织,并且病变部分应尽量附带一些周围的健康组织。

(4)无论是运送新鲜的病料还是冰冻的病料,保证整个过程中,病料始终处于低温状态。

(5)送检过程中要防止倾倒、破碎、避免样品泄漏,要注意有的样品不能剧烈展荡,要注意缓冲放置,所有样品都要贴上能标示采样猪的详细标签。

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